कोशिकाओं के अलग होने के बाद ट्रिप्सिन को निष्क्रिय करने के लिए प्री-वार्म्ड पूर्ण विकास मीडिया के 2 खंड जोड़ें। >95% कोशिकाओं की रिकवरी सुनिश्चित करने के लिए कई बार सेल परत की सतह पर पिपेट करके माध्यम को धीरे से फैलाएं।
मैं ट्रिप्सिन गतिविधि को कैसे रोकूं?
ट्रिप्सिन पाचन को फ्रीजिंग द्वारा रोका जा सकता है या पीएच 4 के नीचे प्रतिक्रिया के पीएच को कम करके फॉर्मिक, एसिटिक, या ट्राइफ्लोरोएसेटिक एसिड जोड़कर रोका जा सकता है (ट्रिप्सिन गतिविधि फिर से शुरू हो जाएगी जब पीएच को पीएच 4 से ऊपर उठाया जाता है)। पचे हुए नमूनों को -20°C पर भंडारित किया जा सकता है।
ट्रिप्सिन को क्या बेअसर करता है?
एक बफर कैल्शियम और मैग्नीशियम आयनों से युक्त भी ट्रिप्सिन गतिविधि को धीमा कर देगा। हालांकि एफबीएस ट्रिप्सिन गतिविधि को रोकने का अधिक प्रभावी तरीका है।
क्या सीरम ट्रिप्सिन को निष्क्रिय करता है?
सीरम गुर्दे के एंजाइमी पाचन और बाद में कोशिकाओं द्वारा संश्लेषित प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम से बचे हुए ट्रिप्सिन को निष्क्रिय कर देता है। सीरम की अनुपस्थिति में हौसले से ट्रिप्सिनाइज्ड कोशिकाओं को मोनोलयर्स में उगाया जा सकता है बशर्ते कि उन्हें अवशिष्ट ट्रिप्सिन को हटाने के लिए बार-बार धोया जाए।
ट्रिप्सिन को निष्क्रिय करने में मीडिया को कितना समय लगता है?
जब तक आप 5-10% सीरम के कम से कम 1:1 अनुपात का उपयोग कर रहे हैं-आपके ट्रिप्सिन के साथ युक्त माध्यम पर्याप्त से अधिक अवरोध होना चाहिए, इसके बाद सेंट्रीफ्यूजेशन होना चाहिए और ताजा माध्यम के साथ मध्यम विनिमय।
