सबसे पहले, EcoR1 और Xba1 दोनों डीएनए को पचाते समय 5' ओवरहैंग छोड़ देते हैं (जैसा कि Nde1 करता है)। दोनों ही मामलों में 3' सिरे को रिक्त किया जाता है, यही वजह है कि पोलीमेज़ आधार जोड़ सकता है। दूसरी बात, सभी पोलीमरेज़ केवल 3' छोर पर आधार जोड़ सकते हैं, इसलिए Klenow दोनों साइटों के पीछे वाले 3' छोर पर 4 आधार जोड़ देगा कुंद सिरों को उत्पन्न करने के लिए।
क्या प्रतिबंध एंजाइम 5 फॉस्फेट छोड़ते हैं?
प्रतिबंध एंजाइमों द्वारा पचने वाले वैक्टर और इंसर्ट में आवश्यक टर्मिनल संशोधन (5' फॉस्फेट और 3' हाइड्रॉक्सिल) होते हैं, जबकि पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) द्वारा बनाए गए टुकड़े नहीं हो सकते हैं।
क्या कुंद सिरों को बांधा जा सकता है?
ब्लंट-एंड लिगेशन
ब्लंट-एंड लिगेशन में उभरे हुए सिरों का बेस-पेयरिंग शामिल नहीं है, इसलिए किसी भी ब्लंट एंड को दूसरे ब्लंट एंड से जोड़ा जा सकता है। कुंद सिरे SmaI और EcoRV जैसे प्रतिबंध एंजाइमों द्वारा उत्पन्न हो सकते हैं।
क्या टाक पोलीमरेज़ कुंद सिरों का उत्पादन करता है?
हां… यदि आप पीसीआर पर 72 dC पर अंतिम विस्तार चरण रखते हैं तो Taq Polymerase A-Overhangs जोड़ता है। अधिकतर टीए क्लोनिंग के लिए उपयोग किया जाता है।
डीएनए अनुक्रमण में क्लेनो खंड का उपयोग क्यों करें?
क्लेनो खंड अनुसंधान-आधारित कार्यों के लिए अत्यंत उपयोगी है जैसे: सिंगल-स्ट्रैंडेड टेम्प्लेट से डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए का संश्लेषण । डीएनए फ़्रैगमेंट के 3' सिरों को खाली करके 5' ओवरहैंग ब्लंट बनाने के लिए भरना । 3' ओवरहैंग्स को पचाना।
