आणविक भार जितना बड़ा होता है, कुंडल उतना ही लंबा और अणु धीमा होता है। अत: वैद्युतकणसंचलन + एसडीएस आण्विक भार के आधार पर अलग होता है, मूल आवेश के आधार पर नहीं। महत्वपूर्ण नोट: समान लंबाई के प्रोटीन को आमतौर पर जेल वैद्युतकणसंचलन + एसडीएस द्वारा अलग नहीं किया जा सकता है।
आप समान आणविक भार के प्रोटीन को कैसे अलग करते हैं?
सेंट्रीफ्यूजेशन, वैद्युतकणसंचलन और क्रोमैटोग्राफी प्रोटीन को शुद्ध करने और विश्लेषण करने के लिए सबसे आम तकनीक हैं। सेंट्रीफ्यूजेशन प्रोटीन को उनके अवसादन की दर के आधार पर अलग करता है, जो उनके द्रव्यमान और आकार से प्रभावित होता है।
कौन सी तकनीक चार्ज के आधार पर प्रोटीन को अलग करती है?
प्रोटीन को उनके शुद्ध आवेश के आधार पर आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी द्वारा अलग किया जा सकता है। यदि किसी प्रोटीन का pH 7 पर शुद्ध धनात्मक आवेश होता है, तो यह आमतौर पर कार्बोक्सिलेट समूहों वाले मोतियों के स्तंभ से बंध जाता है, जबकि ऋणात्मक रूप से आवेशित प्रोटीन नहीं होगा (चित्र 4.4)।
आणविक भार के आधार पर प्रोटीन को अलग करने के लिए निम्नलिखित में से कौन सी तकनीक सबसे उपयुक्त है?
विभाजन पर आधारित क्रोमैटोग्राफी विधियां अलग करने और अमीनो एसिड, कार्बोहाइड्रेट और फैटी एसिड के रूप में छोटे अणुओं की पहचान करने पर बहुत प्रभावी हैं। हालांकि, एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी (यानी आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी) मैक्रोमोलेक्यूल्स को न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन के रूप में अलग करने में अधिक प्रभावी हैं।
किस प्रकार का कॉलमक्रोमैटोग्राफी प्रोटीन को आणविक भार के आधार पर अलग करती है?
जेल फिल्ट्रेशन (जीएफ) क्रोमैटोग्राफी केवल आणविक आकार के आधार पर प्रोटीन को अलग करता है। पृथक्करण एक झरझरा मैट्रिक्स का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है, जिसमें अणुओं की, स्टेरिक कारणों से, विभिन्न डिग्री तक पहुंच होती है - यानी, छोटे अणुओं की अधिक पहुंच होती है और बड़े अणुओं को मैट्रिक्स से बाहर रखा जाता है।
